Medio de cultivo PDA

Ingredientes para 1 litro de PDA

• 1L de agua destilada
• 300gr de papas lavadas
• 15gr de dextrosa
• Alcohol 70º
• Agua oxigenada

Herramientas necesarias

• Placas de Petri
• Envases resistentes al calor
• Balanza
• Cinta microporosa

¿Qué es un medio de cultivo PDA?

El PDA no es más que un gel nutritivo compuesto por papa dextrosa y agar (de ahí vienen sus siglas) que se encargara de dar alimento a nuestro micelio. Antes de comenzar un punto clave y condicional para tener éxito es la asepsia, es recomendable que desinfectemos cada superficie que vayamos a utilizar, de la misma manera cada instrumento que manipulemos en la zona de trabajo

¿Cómo se hace?

• Vamos a lavar lo mejor posible con agua las papas para eliminar tierra que pudieran tener las mismas, a continuación las cortaremos en trozos y las pondremos a hervir en agua durante 45 minutos para obtener un caldo de papas (intentemos que no queden pure). Una vez transcurrido este tiempo colaremos el caldo para conseguir que quede solo el líquido.
• Vamos a colocar este caldo en varios frascos de 350 o 500ml por ejemplo, no los vamos a llenar completamente, para evitar que colapse durante la esterilización, por eso solo los llenaremos un 3/4.
• De ante mano tenemos que tener 30 g de agar agar y 15 gramos de dextrosa que vamos a repartir entre los frascos que vayamos a utilizar a razón de 10 g de agar y 5 de dextrosa en cada uno. Cerramos con su respectiva tapa y agitamos durante un minuto para que se homogenice la mezcla. Si realizamos este paso mientras el caldo de patata está aún caliente se disolverán los ingredientes mucho mejor.
• Una vez listo vamos a proceder a esterilizar nuestro medio de cultivo. En una olla exprés pondremos en el fondo una placa metálica o unos trapos viejos para evitar que nuestros frascos de vidrio estén en contacto directo con el fondo de la olla y exploten. Si disponemos de autoclave el tiempo de esterilizado será de 20 minutos (121ºC 15 psi), de lo contrario si nuestra olla es de cocina entonces lo tendremos 40 minutos desde que la olla comienza a echar vapor. Apagamos el fuego y dejamos enfriar hasta que pierda presión.
• Es importante saber que el medio de cultivo comienza a solidificarse cuando desciende de 40ºC, por eso es recomendable trabajar con el PDA aún caliente. se puede usar cualquier recipiente estéril, personalmente uso placas de Petri que esterilizo antes de usar. Un excelente tip para evitar contaminación es, a parte de esterilizar, echar un poco de agua oxigenada en cada placa de Petri moviéndolas para que esa pequeña cantidad bañe todo el interior. Después echamos un poco de medio de cultivo (10 ml por placa) tapamos y dejamos enfriar. El peróxido no interviene en el crecimiento de los hongos, con lo cual no es necesario retirarlo.
• Una vez listas las dejamos enfriar hasta que solidifique completamente el medio. En caso de que te sobre PDA lo puedes congelar para ocuparlo hasta 6 meses después, siempre volviendo a esterilizar de nuevo.